ABSTRACT
Bovine leptospirosis causes high economic losses in cattle mainly due to reproductive failure, as well as representing public health risk. Since the last century, antibody titers against several Leptospira serovars have been detected by the microscopic agglutination test (MAT) in Mexico. With the exception of very few cases, the presence of serovars causing leptospirosis in cattle and other animal species has not been demonstrated by isolation in Mexico, and in such cases characterization had to be done abroad by complex and slow immunological approaches, by comparison with a number of reference strains. The present study was conducted to perform the molecular characterization of Leptospira isolates by multiple locus sequencing typing (MLST). A hundred and ninety seven sera and kidneys samples were collected immediately after slaughter, from grazing cattle coming from the south-eastern states of Mexico. Anti-Leptospira antibodies were detected by the MAT and kidneys were inoculated into EMJH and Fletcher's specific medium. A seropositivity of 60.4% (119 out of 197), with titers from 1:100 up to 1:3 200 was detected. Four isolates (2.03%), referred as CAL4, CAL6, CAL7 and MOCA45, were characterized by serology, ribotyping and MLST as L. kirschneri serovar Grippotyphosa; L. interrogans serovar Hardjo; L. santarosai serovar Mini and L. santarosai serovar Tarassovi, respectively. With the exception of serovar Hardjo, the three other isolates belong to serovars and species not previously isolated in Mexico. These findings make it necessary to evaluate the potential distribution of such serovars among cattle and their role on animal production and public health.
La leptospirosis bovina causa grandes pérdidas económicas a la ganadería por problemas reproductivos y también es un riesgo de salud pública. En México, desde el siglo pasado se ha registrado la presencia de anticuerpos contra serovariedades de Leptospira por la técnica de aglutinación microscópica (AM), en bovinos y otras especies animales. En muy pocos casos, la enfermedad fue demostrada por el aislamiento de Leptospira, y en tales casos, su caracterización se basó en métodos inmunológicos lentos que requirieron la comparación con cepas de referencia y que fueron realizados fuera de México. En el presente trabajo se realizó la caracterización molecular mediante la secuenciación de locus múltiples (MLST), de aislados de Leptospira obtenidos de riñones de bovinos recolectados en rastro, procedentes de las zonas Golfo y sur de México. Se obtuvieron muestras de suero y riñones de 197 bovinos para realizar la AM, y el cultivo en medios específicos EMJH y Fletcher. Se detectó una seropositividad del 60.4% (119 de 197), con títulos desde 1:100 hasta 1:3,200 y se obtuvieron cuatro aislados de Leptospira (2.03%), denominados CAL4, CAL6, CAL7 y MOCA45. Los aislados fueron caracterizados por serología, ribotipificación y MLST, como L. kirschneri serovariedad Grippotyphposa; L. interrogans serovariedad Hardjo; L. santarosai serovariedad Mini y L. santarosai serovariedad Tarassovi, respectivamente. A excepción de la serovariedad Hardjo, los aislados pertenecen a especies y serovariedades no aisladas anteriormente en la República Mexicana, esto sugiere la necesidad de evaluar su diseminación entre bovinos y su potencial efecto en la producción animal y en la salud pública.
ABSTRACT
The immunogenic protection response to four P. multocida isolations obtained from clinical cases and a reference strain was studied. Isolations were proven as three different immunogens: complete antigen (Ag), washed Ag and culture supernatant. They were subcutaneously administered in SPF light White Leghorn hens. Immune response was evaluated using ELISA test and challenge test evaluated protection response. The ANOVA and Tukey test did not show statistical differences between groups. All isolations using different vaccines induced high protection levels ranging from 87 to 100%. This study indicates that immunization using these three immunogens induce an effective response against P. multocida challenge with the best protection when culture supernatant is used.
Se investigaron los niveles de anticuerpos y la capacidad protectora de cuatro diferentes aislados de P. multocida, obtenidos de casos clínicos y de una cepa de referencia. Los aislados se evaluaron como tres inmunógenos diferentes: antígeno completo (Ag), Ag lavado y el sobrenadante del cultivo. Se administraron en aves ligeras de la raza White Leghorn (SPF) por vía subcutánea. Los niveles de anticuerpos se determinaron mediante el ensayo de ELISA y la protección, desafiando las aves con los respectivos aislados utilizados para vacunación. ANDEVA y la prueba de Tukey no mostraron diferencias estadísticas entre grupos. Todos los aislados en los diferentes tipos de preparación de la vacuna indujeron altos niveles de protección, entre el 87% y 100%. Este estudio indica la efectividad de los diferentes aislados clínicos en la protección de las aves desafiadas.